珠海荧光定量qPCR仪价格

Quantagene q225 系列荧光定量PCR 系统主要特点：精确定量 以可靠的数据助力您的研究。采用拟合算法计算 Ct 值，定量误差不超过±10%。液体冷却循环系统确保孔间温度高度一致，温差不超过 ±0.15°C。光学系统无运动部件，稳定性增加，长期使用无需校准与维护。的仪器间重复性，不同位置、不同反应体积均不影响定量结果。快速高效 用更短的时间获得更多数据。40 个循环的常规 qPCR 只需43 分钟，较常见qPCR 仪多缩短60% 的时间。在提高速度的同时保持了96 孔的高通量，满足绝大多数实验需求。小巧轻便 节省空间及您的宝贵样品小体积为移动实验和大量部署提供可能。5-10 μl 的推荐反应体积，较常规实验节省80%的试剂用量，更节约您的珍贵样品。qPCR荧光标记法分为SYBR Green I染料法为主的荧光染料嵌合法，以Taqman探针法为主的荧光探针法.珠海荧光定量qPCR仪价格

dPCR比qPCR准确度与精密度高。qPCR的效率会受到很多因素影响。例如：试剂保存不当导致部分样本降解、标准曲线偏斜导致CT值受到影响。dPCR 将样本分成若干小的 PCR 反应分区，可实现单分子检测，避免模板间的竞争效应的影响，可提高目的序列的检测准确度。由于dPCR较少受到扩增效率的影响，因此具有更高的准确度与精密度。qPCR面对小的差异较弱，dPCR则可识别差异较小的拷贝数。dPCR比qPCR重复性和通用性高。qPCR只能实现相对定量，即必须使用标准品生成标准曲线，才能进行定量。dPCR是定量，不需要利用标准品绘制标准曲线，也不依赖荧光信号到达设定阈值时所经历的循环数，直接计算样品中目的核酸分子的个数，可实现定量，重复性和通用性高 。因此dPCR可用于常规qPCR所需的标准品定量，具有计量学意义 。湛江准确qPCR仪实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）指的是在PCR进行的同时，对其过程进行监测的能力。

合成引物时需注意：在设计PCR引物时，首先确定要扩增的DNA区域，并设计一对专门位于目标区域的引物，一个在正向链上，另一个在反向链上。引物须具有特异性，避免扩增出非特异性片段。正向引物与反向引物应具有相似的退火温度，GC含量与退火温度相关，调整引物长度可以改变退火温度。避免引物序列有二级结构或引物二聚体，会降低PCR效率。许多的在线工具可用于辅助引物设计。PCR扩增包括三组被设定好的时间和温度，步骤为：变性，退火和延伸1、变性：PCR的第一步称为变性，将模板DNA加热到95°C几秒钟，将两条DNA链分开，使它们之间的氢键迅速断裂。2、退火：反应混合物冷却30秒至1分钟。退火温度通常为50-65°C，但确切的比较好温度取决于引物的长度和顺序。不同的引物可能具有不同的退火温度。3、延伸：温度升至混合物中存在的DNA聚合酶的理想工作温度，通常约为72°C。DNA聚合酶附着在每个引物的一端，并合成与模板DNA互补的DNA新链。

TaqMan试剂：一开始，使用的是嵌入式染料进行的实时荧光PCR (qPCR) 产物定量。但是这些染料存在了重大缺点，即使会同时去检测特异性以及非特异性PCR产物的扩增量。TaqMan方法的开发通过去引入基于Taq DNA聚合酶5’核酸酶活性的荧光标记探针，实时定量PCR系统得到了的提升。这些荧光探针的使用，使得实时定量的方法得到了发展，实现了对特定扩增产物的检测。此外，荧光标记探针的开发，也免去了用于探针降解分析的PCR反应后处理的过程。PCR反应需要五种关键试剂：PCR模板、DNA聚合酶、引物、脱氧核苷酸三磷酸（dNTPs）、PCR缓冲液。

相对定量实验方法包括两种重要方法：ΔΔCT Method：使用内参基因定量所研究样品和参照样品的目的基因。内参基因与目的基因可以同时反应，也可以单独反应；双标准曲线法：对每个样品的内参基因和目的基因都做定量，求出每个样品中内参基因和目的基因的数量，然后根据相对定量的基本公式来求出目的基因的差异表达。定量需要由标准曲线建立Ct值跟拷贝数之间的关系，标准曲线由标准品生成，标准品可以是已知浓度的RNA、质粒或合成的寡核苷酸链生成，定量未知模板时标准样品和未知样品必须同时反应。qPCR实现了通过Ct值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析。广州准确qPCR仪设置

由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，所以成为定量的依据。珠海荧光定量qPCR仪价格

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