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与标准 PCR 一样，SYBR Green 方案由变性、退火和延伸阶段组成。 不同之处在于，您在 qPCR 设置期间将一些双链 DNA 结合染料 SYBR Green I 添加到预混液中。 这种荧光染料在延伸阶段嵌入到双链 DNA 序列中，显示出荧光信号的强烈增加。 在每个热循环结束时测量此信号将使您能够确定存在的双链 DNA 的数量。SYBR Green 检测的缺点是染料会与任何双链 DNA 序列结合。 这意味着您还可以检测非特异性 qPCR 产物（例如引物二聚体）发出的荧光。 为消除这种风险，通过执行熔解曲线分析检查反应特异性，或使用 TaqMan 方法。经荧光定量PCR仪器检测后，对核酸进行定性和定量分析。珠海准确qPCR仪作用

qPCR的实质就是PCR反应，只是在扩增产物上增加了荧光标记，通过仪器对荧光信号进行采集。荧光信号的强度与扩增得到的dsDNA的浓度成正比，因此非理想条件下的PCR荧光强度Rn=R0+YnRs＝RB+Y0(1+Ex)^nRs （Rn：第n次循环时荧光信号强度，R0：背景信号强度，Rs：每个分子的荧光强度），通过对采集荧光信号就能进行初始模板定量、基因表达量的研究。通过对PCR过程中荧光信号的实时监测，荧光强度的变化趋势，呈现出一条S型曲线即“扩增曲线（Amplication plot）”，分为四个时期：基线期、指数扩增期、线性增长期、平台期。广州qPCR仪仪器qPCR只能实现相对定量，即必须使用标准品生成标准曲线，才能进行定量。

qPCR扩增效率100%的理想条件下的PCR反应，PCR产物量呈指数倍增长Yn=Y0×2^n（X0：初始模板量，n：PCR循环次数，Yn：第n次循环后的产物量）而实际PCR扩增时可能存在模板质量不佳引起的PCR扩增抑制，DNA聚合酶的种类及活性影响，非特异性扩增产物的竞争等情况，扩增效率无法达到100%。扩增初期，PCR产物指数倍增加，随着PCR产物的累积，各种影响因素的叠加，PCR产物不再指数倍增加，每个循环后产物增加量恒定，进入线性增长期，dNTP消耗殆尽，酶逐渐失活，扩增“停滞”，产物量恒定，进入平台期。非理想条件下的PCR反应：PCR产物量Yn=Y0(1+Ex)^n（Ex：扩增效率）。

制备DNA——解交联和DNA纯化现在含有目标蛋白质的染色质片段已分离，需要解交联并纯化DNA。解交联通常采用高热孵育和/或消化来完成。注意：此时可以停止ChIP。经过解交联和/或DNA纯化后，可以将样品于-20°C储存。定量DNA——测定目标蛋白质-DNA水平在该步骤中，通过qPCR定量纯化的DNA产物，通过qPCR，您可以确定目标蛋白是否存在于特定位点。ChIP的qPCR如何定量分析ChIP-qPCR 数据需要针对可变性来源进行标准化，包括染色质数量、免疫沉淀的效率（富集效率）和 DNA 回收率。两种常用的标准化 ChIP-qPCR 数据方法——Percent Input法和富集倍数法（Fold Enrichmen）。与input相关的ChIP-qPCR数据包括ChIP的背景水平和input染色质的标准化。建议ChIP 实验重复，尽可能将结果与背景信号和标准误差一起显示。dPCR比qPCR准确度与精密度高。

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SYBR Green是一种DNA插入染料用于qPCR。虽然SYBR Green方法比探针方法便宜，但是特异性没有荧光探针方法好。珠海准确qPCR仪作用

qPCR和dPCR:研究人员已经通过两种方式克服了定量PCR分析的挑战：实时定量PCR(qPCR)和数字PCR(dPCR)。qPCR主要使用插入染料或荧光探针(例如TaqMan)。通过监测PCR期间的荧光强度，可以比较多个样品的DNA水平。数字PCR(dPCR)的基本工作原理很简单。先将样品分为多个PCR反应，每个反应多包含一个模板。然后通过对阳性和阴性反应进行计数来确定初始样品中模板分子的数量。尽管qPCR和dPCR都能够定量样品中的核酸，但它们有一个重要的区别。qPCR只能实现相对定量(例如，样品A的目标序列是样品B的目标序列的两倍)，除非使用此标准生成标准曲线。数字PCR本身是定量的，不需要标准曲线。另一方面，qPCR技术更加成熟和众所周知，市场上有大量商业产品可供选择。dPCR仍然是小的新鲜肉。它不如qPCR使用且价格昂贵。与dPCR相比，qPCR更适合于高通量分析，并且动态范围广。珠海准确qPCR仪作用

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