珠海节省qPCR仪价格

与标准 PCR 一样，SYBR Green 方案由变性、退火和延伸阶段组成。 不同之处在于，您在 qPCR 设置期间将一些双链 DNA 结合染料 SYBR Green I 添加到预混液中。 这种荧光染料在延伸阶段嵌入到双链 DNA 序列中，显示出荧光信号的强烈增加。 在每个热循环结束时测量此信号将使您能够确定存在的双链 DNA 的数量。SYBR Green 检测的缺点是染料会与任何双链 DNA 序列结合。 这意味着您还可以检测非特异性 qPCR 产物（例如引物二聚体）发出的荧光。 为消除这种风险，通过执行熔解曲线分析检查反应特异性，或使用 TaqMan 方法。实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）指的是在PCR进行的同时，对其过程进行监测的能力。珠海节省qPCR仪价格

qPCR扩增效率100%的理想条件下的PCR反应，PCR产物量呈指数倍增长Yn=Y0×2^n（X0：初始模板量，n：PCR循环次数，Yn：第n次循环后的产物量）而实际PCR扩增时可能存在模板质量不佳引起的PCR扩增抑制，DNA聚合酶的种类及活性影响，非特异性扩增产物的竞争等情况，扩增效率无法达到100%。扩增初期，PCR产物指数倍增加，随着PCR产物的累积，各种影响因素的叠加，PCR产物不再指数倍增加，每个循环后产物增加量恒定，进入线性增长期，dNTP消耗殆尽，酶逐渐失活，扩增“停滞”，产物量恒定，进入平台期。非理想条件下的PCR反应：PCR产物量Yn=Y0(1+Ex)^n（Ex：扩增效率）。深圳相对定量qPCR仪SYBR Green I 是一种结合于所有双链DNA（dsDNA）双螺旋小沟区域的具有绿色激发波长的染料。

Quantagene q225 系列荧光定量PCR 系统主要特点：精确定量 以可靠的数据助力您的研究。采用拟合算法计算 Ct 值，定量误差不超过±10%。液体冷却循环系统确保孔间温度高度一致，温差不超过 ±0.15°C。光学系统无运动部件，稳定性增加，长期使用无需校准与维护。的仪器间重复性，不同位置、不同反应体积均不影响定量结果。快速高效 用更短的时间获得更多数据。40 个循环的常规 qPCR 只需43 分钟，较常见qPCR 仪多缩短60% 的时间。在提高速度的同时保持了96 孔的高通量，满足绝大多数实验需求。小巧轻便 节省空间及您的宝贵样品小体积为移动实验和大量部署提供可能。5-10 μl 的推荐反应体积，较常规实验节省80%的试剂用量，更节约您的珍贵样品。

了解了荧光阈值的概念后，Ct 值就很好理解了。C Cycle，t threshold，所谓 Ct 值就是在荧光 PCR 扩增过程中，当扩增产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的扩增循环次数。如上文中图所示，黑色的线显示的是荧光阈值，当信号超过黑色线时所经历的循环数即为 Ct 值。从这也可以了解到 Ct 值是可以变化的，我们实验时带有一定的人为因素。而荧光定量 PCR 后面的数据处理要用到 Ct 值来计算，所以有关荧光阈值的设置就显得尤为重要。一般说来，新手按荧光 PCR仪的自动设置为好，而如果你非常有经验，一般会手动设置荧光阈值。因为 Ct值即达到荧光阈值所经过的循环数，所以它就与模版的拷贝数存在着线性关系，起始拷贝数越多，经过的循环数就越少， Ct 值也就越小，反之亦然。正常的 CT值范围在 18-30 之间，过大和过小都将影响实验数据的精度。前面也提到过，同一模板经过 96 次 PCR 扩增，扩增产物虽然不恒定，但Ct 值极具重现性。根据这个特点，我们可以利用已知起始拷贝数的标准样品的。Ct 值做出标准曲线，只要在同一次 PCR 实验中得到未知样品的 Ct 值，就可以根据曲线算出该未知样品的起始拷贝数。荧光检测系统可接收荧光信号，每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，荧光信号累积和PCR产物形成是同步。

PCR：Polymerase chain reaction. 是体外模拟生物的DNA 复制。需要DNA 聚合酶，DNA 模板，两端引物，脱氧核苷酸dNTPs( dATP, ACTP, dGTP, dTTP),以及适当的缓冲体系。PCR 产物的增长形式为２N (如果各种试剂和外部所加条件均理想化，N 是循环数)。实际中，扩增效率不为100％。Real time PCR 是定量PCR 的一种，当然是在PCR 的基础上发展出来的。（普通）PCR 包含很多因素，属性，如：试剂，温度，循环数，程序，PCR 产物（扩增子，amplicon）的量，扩增曲线（扩增子累积曲线），掺错率，扩增子长度。一般来说，人们关心的是扩增子的量。而real time PCR 主要利用的是扩增曲线（amplification curve）, 循环数；扩增子长度，扩增效率，扩增子多少，也加以考虑。qpcr在扩增每个循环中模板DNA通过变性、复性、延伸三个阶段形成更多的子代DNA，为下一个循环提供模板DNA。华南地区灵敏度qPCR仪供应商

qPCR通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。珠海节省qPCR仪价格

qPCR技术的本质是PCR技术，在扩增的每个循环中模板DNA通过变性、复性、延伸三个阶段形成更多数量的子代DNA，为下一个循环提供模板DNA。在每个循环结束后，仪器会激发荧光物质并检测一次荧光信号，那么每一个循环都会对应一个荧光信号值，将所有荧光信号值用光滑的曲线进行连接起来，便是 qPCR扩增曲线。如图所示，根据qPCR扩增曲线整体趋势，整个扩增过程主要分为四个时期，分别是基线期、指数增长期、线性增长期和平台期。在基线期和平台期，荧光信号均维持水平状态，均不适用于对初始模板进行定量分析。在线性增长期，虽然扩增反应仍在进行，但随着反应产物的积累，PCR反应受到明显抑制导致扩增效率不断降低，此时产物不再以指数形式增长，同样不适用于定量分析初始模板量。珠海节省qPCR仪价格

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